1.競爭法

　　競爭法一般分為直接競爭法和間接競爭法，這里我們以直接競爭法為例進行原理講解。直接競爭法，其基本原理是：將合適濃度的包被抗體包被于微孔板中，加入無關蛋白載體封閉未結合位點，加入標準品（樣本）和生物素標記的抗原物質進行競爭結合，經(jīng)合適的溫度和一定時間的孵育，洗滌后，加入HRP標記的鏈霉親和素進行反應，TMB顯色，微孔板中顏色的深淺與待測物的濃度呈負相關。（例如：褪黑激素檢測試劑盒采用的就是競爭法）

　　該方法一般用來檢測具有較少表位的小分子物質，當然，這種方法也可以用來檢測大分子抗原物質甚至是抗體。檢測大分子抗原物質時，由于空間位阻的影響，使得該檢測方法沒有雙抗體夾心法檢測大分子抗原物質靈敏度高。這種方法在檢測抗體時，可能由于兩種競爭的抗體來源不一，導致兩種抗體趨同性不高，就使得檢測結果的可靠性不高。

　　2.雙抗體夾心法

　　雙抗體夾心法，其基本原理是將一定量的包被抗體以物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入無關蛋白載體封閉未結合位點，然后加入待檢標本，通過加入檢測抗體，酶標記第二抗體后用TMB底物顯色，微孔板中顏色的深淺與待測物的濃度呈正相關。

　　該方法的適用條件是：含有多個抗原表位的大分子物質。因為這種檢測方法需要兩種抗體，所以就涉及抗體配對的問題。一般而言，常用的抗體配對方法有一下幾種：包被抗體為單抗，檢測抗體為多抗；包被抗體為單抗，檢測抗體為單抗，但這兩種單抗針對的抗原表位不同；包被抗體為多抗，檢測抗體為多抗，這兩種多抗一般是來源于不同的宿主。

　　這種檢測方法在應用酶標第二抗體時，應該注意的一個原則是：第二抗體必須只能針對檢測抗體，而不能針對包被抗體。鑒于酶標二抗的局限性，現(xiàn)在一般都引入生物素親和素放大系統(tǒng)，這種系統(tǒng)在提高反應靈敏度的同時，應用起來也更加方便，我們只需要對檢測抗體進行生物素標記，不需要對每一種不同來源的二抗進行酶標記，只需對親和素做HRP標記就可以省去很多繁瑣的工作。（例如：CYR61ELISA試劑盒采用的是雙抗體夾心法）

　　3.雙抗原夾心法

　　雙抗原夾心法，與雙抗體夾心法類似，基本原理是將已知濃度的抗原固定于聚苯乙烯微孔板表面，對未結合位點用無關蛋白載體進行封閉后，加入待檢樣本，然后加入生物素標記的抗原和HRP標記的鏈霉親和素，經(jīng)TMB顯色和終止反應，酶標儀讀數(shù)之后即可計算待測物濃度。雙抗原夾心法與間接法都可以對抗體進行檢測，但是前者檢測的是針對該抗原的所有種類的抗體，包含IgG,IgM,IgA，IgD,IgE，這是間接法做不到的。（例如：muskELISA檢測試劑盒采用的就是雙抗原夾心法）