ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)在必定溫度下的反響時(shí)刻并不是反響的結(jié)尾，溫育時(shí)刻過(guò)短、溫度過(guò)低，易致顯色不全；溫育時(shí)刻過(guò)長(zhǎng)、溫度過(guò)高，易致非特異性緊附于反響孔周圍，難以清潔*，發(fā)生陰性高值或假陽(yáng)性反響。
要嚴(yán)厲按規(guī)則的溫度和溫育時(shí)刻進(jìn)行。如果參加的酶物過(guò)多或加在較高的孔壁上或孔口，也會(huì)致使本底添加或假陽(yáng)性。
水浴箱門，嚴(yán)厲控制水浴的溫度為37±0.5。同時(shí)，微孔板不可堆疊放置，以確保傳熱均勻，各板的溫度都能敏捷到達(dá)平衡。
當(dāng)標(biāo)本收集保留不妥發(fā)生溶血時(shí)，紅細(xì)胞中的血紅蛋白釋放到血清中，血紅蛋白具有過(guò)氧化物酶的性質(zhì)，其通過(guò)吸附或“PP效應(yīng)"（蛋白質(zhì)間相互吸附的景象）后，可催化A、B液顯色而形成假陽(yáng)性。
因?yàn)樵噭┖幸话阍O(shè)定的反響溫度為37度，在這個(gè)溫度下溫育必定時(shí)刻，蒸騰的水分會(huì)許多，關(guān)于全部反響系統(tǒng)來(lái)講，各種反響物的濃度會(huì)不斷地添加，這么必會(huì)致使反響zui終的值添加。
如果ELISA試劑盒樣品稀釋液少加或血清多加，都會(huì)致使本底增高。關(guān)于間接法來(lái)說(shuō)，受上述兩個(gè)因素影響更大。
因?yàn)檠逯惺軝z的特異性IgG只，IgG中的一小有些。IgG的吸附性很強(qiáng)，非特異性IgG可直接吸附到固相載體上，有時(shí)也可吸附到包被抗原的外表。
這些非特異性的IgG均能夠和酶標(biāo)二抗發(fā)作反響而形成較高陰性本底或假陽(yáng)性。假如參加的血清過(guò)多，高于規(guī)則的稀釋倍數(shù)，很容易形成高值陰性。反之，形成假陰性。