由于以漸近線開始和結(jié)束，曲線范圍之外的數(shù)據(jù)可能會產(chǎn)生不的結(jié)果。更進(jìn)一步說，試著在S中間標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)工作。一般來說，未知計算在曲線的線性范圍內(nèi)更。可以稀釋超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍的樣本，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度，然后根據(jù)初始稀釋值乘以相應(yīng)倍數(shù)。做ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線需要注意事項如下：

　　1、樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出來的，所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事，否則后面的實驗結(jié)果無從談起。

　　2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi)，包括上限和下限。而對于呈S型的標(biāo)準(zhǔn)曲線，盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度zui陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。

　　3、最好采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度，這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離。

　　4、檢測標(biāo)準(zhǔn)樣品時，應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高性。

　　5、標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個點，但至少要保證有5個點。

　　6、做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒炓蟛煌兴儎?，但一般來說，相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98，對于有些實驗，至少要0.99甚至是0.999。