ELISA測定的陽性判斷值,通常是將大量陰性和陽性人群的測定數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析后確定的,其確定依據(jù)為判斷結果的假陽性和假陰性率低。在陽性判斷值周圍一定范圍內(nèi)之外的測定結果可歸為可疑,亦即ELISA測定的“灰區(qū)”。“灰區(qū)”的大小可用統(tǒng)計學方法確定。測定結果處于“灰區(qū)”的樣本,可通過確認試驗或追蹤檢測來確定到底是陽性還是陰性ELISA“灰區(qū)”是把定量分析的正常值范圍引入定性分析而建立的概念。

　　目前各種形式的ELISA自動分析儀已經(jīng)進入市場,如廣泛應用于血站系統(tǒng)的微板式全自動酶免分析儀,其試劑為開放式的,而對于其它類型的,則試劑和儀器往往是配套的。但當前大部分醫(yī)學實驗室均采用手工操作加儀器測定的方式。ELISA操作步驟復雜,操作不當將引起較大的誤差。以下敘述各個步驟中的影響因素。加樣器是一種比較精密的工具,其在長時間使用時會因機械磨損或者推動桿內(nèi)附著血痂等原因造成加樣不準,尤其是對于樣本量較大的臨床實驗室,因此必須定期對加液器進行維護和校準。每次加不同的標本時均需更換吸嘴,以免發(fā)生交叉污染。加樣時速度不可太快,避免將標本加在孔壁上部,并注意不要濺出或產(chǎn)生氣泡。加樣時還應當注意操作時差對結果的影響,操作時差是指加入標本、試劑及混勻時間的差異。操作時差在每個實驗中都存在,尤其是手工操作,日常檢測標本多達幾百個,從加入標本到后一個標本,需幾十分鐘,加入試劑及混勻等均存在著前后時間差異,使抗原抗體反應和酶促反應時間不一致,操作時差對競爭法檢測的結果影響更大,在加酶結合物和底物時可用定量多道。